Biotecnologia IgY aplicada ao imunodiagnóstico da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina

Abstract

O objetivo deste trabalho foi aplicar a tecnologia IgY no desenvolvimento de um teste imunoenzimático, ELISA, para o diagnóstico do FIV, contribuindo no estabelecimento de um modelo de produção para um kit nacional na área de medicina veterinária. A primeira etapa do desenvolvimento deste trabalho consistiu na revisão da literatura dos documentos próprios para produtos de uso veterinário, destinados a diagnosticar doenças dos animais, disponibilizados na legislação vigente. A consulta aos documentos nacionais e internacionais potencializou o esclarecimento de parâmetros de desempenho ou critérios de validação de métodos, para o desenvolvimento deste novo produto, denominado ELISA r-p24 IgY. A segunda etapa consistiu no estabelecimento da produção, purificação e caracterização físico-química da proteína recombinante p24 do FIV. A preservação da atividade biológica foi demonstrada por Western Blot com a presença de uma banda peptídica de aproximadamente 25 kDa, referente à proteína r-p24. A terceira etapa deste trabalho, consistiu na obtenção de anticorpos IgY anti-IgG de gato, a partir da inoculação em galinhas poedeiras. A cinética foi acompanhada por ELISA demonstrando um aumento gradativo do título de anticorpos na gema a partir da segunda semana, com um aumento significativo no 2° mês, e mantendo-se elevado durante todo o período de cinco meses. As concentrações médias de proteínas na galinha 1 foi de 40,1 mg/mL a partir de uma gema e na galinha 2 foi de 32,2 mg/mL por gema, no período de 5 meses. A quarta etapa deste trabalho consistiu no emprego da tecnologia IgY para o desenvolvimento, padronização e a validação do teste de Elisa r-p24 IgY para o diagnóstico da infecção causada pelo FIV. Os resultados obtidos foram: a acurácia de 99%, a sensibilidade de 97,7%, a especificidade de 99,5%, e o índice kappa de 99,1%. Na quinta etapa deste trabalho realizou-se o estudo comparativo do ELISA r-p24 IgY frente ao ELISA r-p24 IgG, e foi demonstrado o desempenho superior no ELISA r-p24 IgY. A validação do ELISA r-p24 IgY mostrou características desejáveis para o uso comercial, tais como alta precisão e manutenção da reatividade por um período mínimo de 12 meses. Conclui-se que o procedimento elaborado foi eficiente e possibilitou o desenvolvimento de um teste para o diagnóstico do FIV. O domínio da Tecnologia IgY poderá contribuir com a pesquisa e o desenvolvimento de novos ensaios atendendo às normas e diretrizes nacionais e internacionais, tanto de bem-estar animal como de validação, impulsionando o desenvolvimento nacional de kits diagnósticos de interesse em saúde humana ou animal.